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      組織細胞裂解液
      本產品裂解細胞獲得的裂解產物,可用于PAGE,蛋白印跡(WB),免疫沉淀(IP),免疫共沉淀(co-IP)和蛋白與多肽的分離純化。
      編號:WB-0061 規格:30ml
      價格:48.00 數量:大量
      產地:鼎國

      包裝清單:

      組織細胞裂解液

      30ml(-20保存)

      PMSF100X

      350ul(-20保存)

      使用說明書

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      使用說明 

      1.培養細胞
           
      取出裂解液,待融化后顛倒混勻數次,適量分裝凍存。在使用前取出PMSF(100mM),按比例加入(使其最終濃度為1mM)混勻,立即使用。

       貼壁細胞:去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗2-3(如血清中的蛋白沒有干擾,也可以不洗)。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞數秒后細胞就會被裂解。

      懸浮細胞:收集培養細胞,離心去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗2-3(如血清中的蛋白沒有干擾,也可以不洗),用手指把細胞用力彈散,按6孔板每孔細胞加入100-200微升的比例加入裂解液。如果細胞數量較大,應按50-100萬細胞/管分裝或根據細胞數量按比例增加裂解液。用手指輕彈管底以促進裂解液和細胞充分接觸,裂解完全時應無明顯的細胞顆粒。

      裂解物經10,000-14,000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

      裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入100微升裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150微升或200微升。

       2.組織樣品 
           
      Ep管,分別稱重標記,把組織剪切成小塊裝入Ep管中,稱重。按每20毫克組織加100-200微升的比例加入裂解液(如裂解不完全,可以適當增加用量;如需要的蛋白樣品濃度較高,可以適當減少用量)。用手握式電動組織細胞勻漿器勻漿約1分鐘或直至充分裂解。10,000-14,000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

          如果組織樣品本身非常細小,如淋巴細胞,可直接加入裂解液,通過振蕩(Vortex)以使樣品裂解完全。

      保存條件:
           PMSF
      需-20保存,裂解液若經常使用,可于4保存至少三個月。若長期保存,建議置于-20。

      注意事項 

       1、為獲得最佳的實驗效果,可適當分裝使用,以盡量避免反復凍融。 
       2
      、PMSF應現用現加。 
       3
      、裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4進行。 
       4
      、蛋白酶抑制劑均有較高的毒性,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套          操作。一旦直接接觸,請立即用流水沖洗,再向醫療保健結構咨詢。

         

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      京公網安備 11011402011307號

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