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      Folin-酚試劑盒
      folin-酚試劑法(lowry法)測蛋白質含量
      編號:FLF01 規格:50ml
      價格:70.00 數量:大量
      產地:鼎國

      Folin—酚試劑

      原理:Folin-酚法:(Lowry法)這種蛋白質測定法是最靈敏的方法之一。Folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基還原,產生深藍色(鉬蘭和鎢蘭的混合物)。在一定的條件下,藍色深度與蛋白的量成正比。  

       技術指標:本試劑盒可測定蛋白濃度0.05--1mg/ml。當蛋白濃度范圍在0.05-0.5mg/ml范圍時,線性關系最好。標準曲線相關系數:R2大于0.99.

          1.Folin—酚試劑甲

      溶液I: 2g無水碳酸鈉和20mg酒石酸鈉溶于100ml 0.2mol/l氫氧化鈉中(已配制成5X,用時稀釋5倍,使用完需另配)。

      溶液Ⅱ: 0.5g五水硫酸銅溶于100ml水溶液。

      將稀釋后的溶液I與溶液Ⅱ,以50:1的比例混合,混合后即為Folin—酚試劑甲,此試劑只能用一天,過期失效。

      2.Folin—酚試劑乙

      原液濃度為2moL/L使用前需稀釋一倍,用多少稀釋多少。使其最后濃度為1moL/L。此為Folin—酚試劑乙應用液。Folin—酚試劑乙原液平時應密封貯存于4℃冰箱中避光保存。

      3.操作方法

      標準曲線的制作

      取14支試管分成兩組,按下表順序加入試劑,混勻,于室溫放置10分鐘。再加入0.5毫升試劑乙,立即搖勻,在室溫放置30分鐘,然后于500nm處比色。測定光密度值。取兩組測定的平均值,以蛋白質濃度為橫座標,光密度值為縱座標,繪制標準曲線為定量的依據。

      試劑/管號

      0

      1

      2

      3

      4

      5

      6

      BSA/ml(250ug/ml)

      0

      0.1

      0.2

      0.4

      0.6

      0.8

      1.0

      蒸餾水/ml

      1.0

      0.9

      0.8

      0.6

      0.4

      0.2

      0

      試劑甲/ml

      5

      5

      5

      5

      5

      5

      5

      試劑乙/ml

      0.5

      0.5

      0.5

      0.5

      0.5

      0.5

      0.5

      樣品測定:

      (1)取1毫升樣品溶液(約含20-250微克多肽或蛋白質)加入5毫升試劑甲混勻,于室溫放置10分鐘。

      (2)加入0.5毫升試劑乙(folin—酚),立即搖勻,于室溫保溫30分鐘;然后500nm(根據使用情況)處比色,以1毫升水代替樣品作空白對照。測定后,可以從標準曲線中查出未知樣品濃度。

      若用0.5厘米光程的比色杯進行比色,可按下面方法進行操作:取0.2毫升樣品溶液(約含5-100微克多肽或蛋白質),加入1毫升試劑甲(可選用0.3-0.5厘米直徑的小試管)混勻,10分鐘以后,再加入0.1毫升試劑乙,立即混勻,30分鐘后比色,一般來說,若多肽或蛋白質濃度在2-25微克,則采用波長755nm,而25微克以上則采用500nm比色為宜(波長選擇依使用情況)。

         
       

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      參考資料

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